組織被冷凍時，組織中的水變成冰，而在這種狀態(tài)下，組織變堅硬。冰凍塊的硬度可通過改變組織溫度來改變。降溫會使組織塊更加堅硬，提高溫度使組織變軟。大多數非脂肪不固定組織的切片最好在-20到-25℃制作。
冰凍切片的制作過程中，常有許多因素影響其質量，并進一步影響結果的觀察和分析，甚至會影響診斷，造成無法挽救的后果，對此我們經過比較及總結得出如下經驗。
冰凍溫度及組織冰凍的時間對冰凍切片質量的影響是至關重要的。
溫度太低，細胞容易收縮，溫度太高，細胞容易膨脹，結構不清，模糊，影響冰凍診斷。充分利用冷凍臺、冰錘及速凍頭的功能。
乳腺組織（纖維腺瘤，間質膠原化）含纖維組織較多，冰凍切片染色時容易脫片。
1、使用免疫組化防脫載玻片進行貼片，冰凍切片脫片率明顯下降。
2、乳腺含脂肪組織比較豐富，在冰凍切片時不容易成片或展片。
3、乳腺組織在取材時，取材醫(yī)生應盡量將病變周圍的脂肪組織剔除。
4、當遇到脂肪組織較多，又無法剔除時，建議使用液氮。
（二）子宮肌瘤的冰凍切片
1、溫度的控制：
冷凍溫度是冰凍切片的關鍵；
冷凍室溫度設定-17°C~-22°C；
控制肌瘤組織冷凍時間，4/5組織凍好就可以；
冷凍過頭時拿出冷凍室解凍軟化一下。
雖然有可能加長了冷凍時間，但可以將組織牢牢固定?。?/span>
與常規(guī)石蠟切片一樣，先用舊刀口粗修，再用新刀口搖片；
修片時只要組織完整就可以，因為越離凍頭近組織塊越硬；
在制片過程中，很多因素均可影響冰凍制片質量和正確診斷，冰晶的形成就是主要因素之一。當冰晶溶解形成空泡時，會使細胞內結構移位而造成誤診。冰晶也可以引起細胞間針狀裂隙，以及空泡擠壓組織，導致組織正常結構改變。特別是冰晶小而多時，對組織結構損害更大，可以導致醫(yī)生們無法及時地為臨床提供準確的病理診斷依據。
生物體是由細胞構成的，細胞中水分約占80%～90%，水在各種組織中含量最多。因為水在結冰時因氫鍵的交聯而膨脹，所以待檢的標本在冷凍過程中，水份很容易形成冰晶，使切片出現大量冰晶孔隙以及大小空泡，造成冷凍假象。在含水量較多的組織中更易發(fā)生。
一些含水量特別多的組織像腦組織、腎臟組織等冷凍時很容易產生冰晶。當組織中的水分凝固時形成球形的冰晶，擠壓纖維組織條而產生泡沫樣的形狀，使切片出現大量冰晶孔隙以及大小空泡的冷凍假象。在有些冰凍切片中的細胞胞漿和細胞核里含有較多的空泡、空洞，也是冰晶造成的一種冷凍假象。
冰晶的大小與其生長速率成正比，而與形成速率（成核率）成反比，也就是冰晶形成的數量愈多則愈小，對組織結構影響也愈嚴重。有文章認為冰凍開始時，冰晶形成速率較慢，以后逐漸增加，其臨界溫度為-3.3℃。從-3.0℃降至-4.3℃之間，形成速率急劇增加，然后再減慢。因此，在制片時首先必須做到組織在極短的時間內驟冷速凍，才能保證鏡下觀察時沒有冰晶干擾，組織結構才能清晰，細胞形態(tài)才能完好。
怎樣才能做到組織在極短的時間內驟冷速凍呢？基于上述理論，驟冷速凍的關鍵在于：取材的厚度、組織冷凍時的溫度和時間、以及取材外部環(huán)境等。據此，可以采取以下措施，減少冰晶的形成。
5、防止與減少冰晶形成的方法：
?。?）重視冰凍切片環(huán)節(jié)中的速凍
組織的厚度決定著速凍的時間，如果太厚，會導致標本的表面還沒有冷凍，而貼近速凍臺的一面溫度已經太冷。在不影響病理診斷的前提下，標本取材盡量小一些，控制在1.5cm×1.5cm×0.3cm，厚度不超過4mm，這樣有利于組織的快速凍結，并將組織塊盡快移到冷凍頭上驟冷，以縮短冷凍時間。
避免由于緩慢冷凍而產生冰晶。臨床科室若需術中冰凍，應先通知病理科，以便提前開機做好預冷。將冰凍切片機的溫度降至－20℃～－25℃。一般將冷凍箱溫度降至－25℃，冷凍頭溫度降至－30℃。
?。?）保持刀具與臺面的干燥
取材時盡量保持刀具與臺面的干燥，避免組織與水接觸，如送檢組織內含水或血性液體，應用干的紗布或濾紙把水份吸干后再行冷凍。
臨床醫(yī)師送檢標本盡量避開水源不要用生理鹽水浸泡或用濕紗布包裹組織，由于液體浸泡后，組織內水分會增加，容易造成冰凍后冰晶形成，建議將送檢標本裝入塑封袋送檢。
將新鮮組織迅速置于包埋托上，再將組織的表面全部用進口OCT膠包被后放入低溫切片機內冷凍切片，這樣既可以提高冷凍速度，又可以避免接觸空氣后產生干、濕影響。
冰凍切片不能太薄，一般≧6μm，6μm的片子可以有更多的空間避免風干假象，也會減少冰晶所造成的細胞核空洞。
“冰晶”是影響腦組織冰凍切片質量的罪魁禍首。如何避免或盡可能減少“冰晶”是我們急需解決的問題。
掌握“三度”是解決問題的關鍵：濕度、溫度、速度
取材厚度要適當，以3~5mm為宜，取材過厚，則冷凍時間需要延長，等到組織全層凍硬了，則表面的組織已經凍過頭，過硬的表層組織切片易碎，或呈粉末狀。如組織厚度過薄，在2mm以下則容易修片過度，造成組織完整性受損或切到組織冷凍托頭。
組織在包埋時可在凍頭上制作一個OCT凍托，待凍托基本凝固時，將組織放在凍托上，再在組織周圍放上OCT后速凍。放置OCT時要注意將其中的小氣泡盡量去除，以免影響旁邊組織產生擠壓和褶皺。包埋在將組織完全埋入OCT膠的基礎上，還應在組織周圍留有多余的OCT，以利于牽引展開切片使用，否則出刀、入刀處會有褶皺影響制片效果。
氣管切緣等軟骨類組織的冰凍切片機溫度一般設定在-22℃左右，溫度過高造成組織偏軟，容易產生搓板狀、梯田狀、厚薄不均，溫度過低則硬度過硬，使得組織容易破碎或產生粉末狀現象。冰凍時間一般以組織剛剛發(fā)白即進行修片為宜，以免冷凍時間過長造成組織溫度過低，發(fā)硬、難以切片。當修片時發(fā)現冷凍過頭時可以用指腹貼近組織3~5s，使組織迅速升溫到適宜的溫度，并且觀察組織切面變化掌握適宜時機，切出完整切片。
首先要做好準備工作，如刀要鋒利，若用一次性切片刀，要根據情況，做到及時的更換刀片。檢查刀架，鎖牢各關節(jié)，防止切片時“跳片”等情況出現。調整刀架角度、刀片也應在刀架上凍置一段時間后再切，因為新換上的刀片由于溫度較高也可能會造成切片粘連。切片時用力要均勻、柔和。切片機配有防卷板時應注意抗卷板與刀鋒距離，如不帶有防卷板或不習慣使用時要注意牽引展開切片的力度，既要防止力度過小時出現的褶皺，也要避免用力過大造成的組織破裂。附貼切片時動作也需輕巧、快速、用力需均勻，防止切好的組織卷曲出現褶皺。
切完組織切片應立刻放入固定液中，防止切片干后再固定造成的細胞核染色質的不清晰。固定時間以30s左右為宜，既使得組織得到充分固定，亦防止由于固定浸泡時間過長造成組織脫片。同時需要指出的是濃度過低的固定液有時也可能是組織脫片的原因之一。
結論：冰凍切片是較難掌握的病理技術之一，要制作出一張優(yōu)質的冰凍切片，醫(yī)生和技術員都必須加強責任心。做到冰凍制片的每一個環(huán)節(jié)都精益求精，并且不斷總結經驗和教訓，逐步提高切片質量，縮小與常規(guī)石蠟切片的差距，減少冰凍切片的人為假象，才能為正確的病理診斷提供有力保障，才能更好地服務于臨床，切實做到對患者負責。
