結(jié)締組織

結(jié)締組織含有3種纖維，即膠原纖維、網(wǎng)狀纖維和彈力纖維。這3種纖維廣泛分布于人體和動(dòng)物身體各處，具有營(yíng)養(yǎng)、支持、防御保護(hù)和創(chuàng)傷修復(fù)等功能。這3種纖維在HE染色時(shí)不宜區(qū)分，可通過特染加以鑒別。

(一)膠原纖維

膠原纖維主要是由成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的一種膠原蛋白絞鏈而成，是結(jié)締組織3種纖維中含量最多、分布最廣的一種纖維，在皮膚、鞏膜和肌腱中尤為豐富。膠原纖維分子中含有堿性氨基酸，能夠與酸性染料進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)。

Masson 三色染色法

1、染色步驟

①脫蠟至水：二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min，二甲苯Ⅲ5min，無水乙醇1min，95%乙醇1min，75%乙醇1min，自來水沖洗數(shù)秒；

②用配置好的Weigert鐵蘇木素染色液染色8分鐘；

③酸性乙醇分化液分化15秒，水洗；

④Masson藍(lán)化液返藍(lán)5分鐘，水洗。蒸餾水洗1分鐘；

⑤麗春紅品紅染色液染色5分鐘；

⑥弱酸工作液洗1分鐘；

⑦磷鉬酸溶液洗1分鐘，弱酸工作液洗1分鐘；

⑧苯胺藍(lán)染色液染2分鐘，弱酸洗1分鐘；

⑨脫水透明：95%乙醇快速脫水2-3秒，無水乙醇脫水3次，每次5-10秒，二甲苯透明3次，每次1-2分鐘，中性樹膠封固；

2、結(jié)果：膠原纖維、黏液、軟骨呈藍(lán)色(如亮綠液染色為綠色)，胞質(zhì)、肌肉、纖維素、神經(jīng)膠質(zhì)呈紅色，胞核黑藍(lán)色。

3、注意事項(xiàng)

(1)麗春紅酸性品紅液經(jīng)磷鉬酸分化時(shí)須在顯微鏡下控制至肌纖維清晰為止。

(2)用亮綠代替苯胺藍(lán)染料，膠原纖維被染成綠色。

(3)用Weigert鐵蘇木色精染細(xì)胞核，著色深不易褪色。

4、應(yīng)用 膠原纖維染色主要用于幫助判斷梭形細(xì)胞腫瘤的來源，如是否為纖維性腫瘤，也可用于顯示組織或器官的損傷、修復(fù)與纖維化情況，如早期肝硬化、心肌瘢痕灶等纖維組織增加或減少性病變。

(二)網(wǎng)狀纖維

網(wǎng)狀纖維是結(jié)締組織內(nèi)的一種交錯(cuò)排列的纖細(xì)纖維，交織堆集呈致密網(wǎng)狀，故得名。網(wǎng)狀纖維是構(gòu)成組織的網(wǎng)狀支架，在HE染色時(shí)不易被辨別，銀氨溶液浸染能使其變成黑色，故該纖維又稱為嗜銀纖維。染色的基本原理為網(wǎng)狀纖維表面的糖蛋白與銀化合物結(jié)合，再經(jīng)過甲醛還原成為金屬銀沉淀于纖維內(nèi)。網(wǎng)狀纖維染色可顯示網(wǎng)狀纖維及基底膜物質(zhì)，其中網(wǎng)狀纖維主要由Ⅲ型膠原纖維組成，在機(jī)體結(jié)締組織中廣泛存在；基底膜主要由Ⅳ型膠原及層粘連蛋白組成。

Gomori 銀染色法

1、染色步驟

(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水。

(2)高錳酸鉀液氧化5min,自來水洗1min。

(3)草酸液漂白2min，水洗2min

(4)硫酸鐵銨液媒染5min，水洗1min，蒸餾水洗2次。

(5)Gomori銀氨液3min，蒸餾水洗2次。

(6)10%甲醛液還原5min，蒸餾水浸洗2次。

(7)常規(guī)乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2、結(jié)果：網(wǎng)狀纖維呈黑色，核灰色，其他組織呈對(duì)比染色的顏色

3、注意事項(xiàng)

(1)配制銀氨液所需器皿要洗干凈，所用的蒸餾水要純。

(2)配制銀氨液時(shí)加氨水要適量，不能過多，也不能過少。配好后的銀氨液遇光或受空氣作用后易解離析出銀鹽，故需密封避光保存。銀氨液一般宜新鮮配制，置于4℃冰箱中可保存數(shù)天。

(3)避免染色時(shí)間過長(zhǎng)出現(xiàn)銀顆粒沉淀。

4、應(yīng)用 網(wǎng)狀纖維染色在腫瘤病理診斷中具有鑒別診斷作用：①區(qū)分癌與肉瘤，網(wǎng)狀纖維包繞癌巢周圍，而不存在于巢內(nèi)癌細(xì)胞間；大多數(shù)肉瘤則在單個(gè)瘤細(xì)胞間可見較豐富的網(wǎng)狀纖維；②區(qū)分某些間葉組織腫瘤：如在典型的纖維肉瘤中，具有豐富的網(wǎng)狀纖維且分隔包繞單個(gè)瘤細(xì)胞；典型的惡性外周神經(jīng)鞘膜瘤中，網(wǎng)狀纖維則與梭形細(xì)胞平行分布，并不包繞瘤細(xì)胞。除應(yīng)用于腫瘤性病變，網(wǎng)狀纖維染色還可以幫助觀察肝組織病變處的網(wǎng)狀支架塌陷、破壞或增生等改變。

(三)彈力纖維

彈力纖維廣泛分布于身體各處，特別在肺泡、動(dòng)脈壁、支氣管及皮膚等處最為豐富。其主要成分為含有豐富二硫鍵(R-S-S-R)的糖蛋白，故又稱為彈力蛋白。

醛品紅染色法

1、染色步驟

(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水

(2)Lugol碘處理5min,稍水洗

(3)5%硫代硫酸鈉水溶液處理5min，流水沖洗5min

(4)70%乙醇稍洗。

(5)醛品紅染10min。

(6)70%乙醇浸洗2次，每次約30s，至切片不再脫色為止，稍水洗。

(7)橙黃G染液染約Is，稍水洗。

(8)常規(guī)乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2、結(jié)果 彈力纖維深紫色，黏液紫色(肥大細(xì)胞顆粒、胰腺B細(xì)胞顆粒、垂體B細(xì)胞均能同時(shí)著色)，背景呈不同程度的黃色。

3、注意事項(xiàng)

(1)醛品紅溶液置4℃冰箱內(nèi)保存，可保存6個(gè)月，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫，若保存時(shí)間過長(zhǎng)，則染色時(shí)間亦要加長(zhǎng)。

(2)橙黃G溶液要淡染，以避免掩蓋彈力纖維的顏色。

4、應(yīng)用 彈力纖維染色常用于觀察病變中彈力纖維是否增生或破壞，如肺氣腫等的彈力纖維斷裂、變性或萎縮；高血壓病的小動(dòng)脈管壁彈力纖維異常增生；動(dòng)脈粥樣硬化癥時(shí)動(dòng)脈管壁彈力纖維的崩解、斷裂與缺失；皮膚組織病變中彈力纖維增生、卷曲、變性、崩解等變化，以及各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織中的血管壁損害和增生等情況。此外，彈力纖維染色對(duì)彈力纖維瘤的診斷有決定作用。