細(xì)胞學(xué)是病理學(xué)的重要組成部分，具有經(jīng)濟(jì)實用、簡便可靠的特點(diǎn)，在腫瘤的早期診斷中具有重要意義。細(xì)胞病理學(xué)檢查是指對取自人體的各種體液、分泌物、刮出物等樣本以及穿刺細(xì)胞涂片，結(jié)合患者的臨床資料做出疾病的細(xì)胞病理學(xué)診斷，以指導(dǎo)臨床治療和判斷預(yù)后的過程。細(xì)胞病理學(xué)工作必須安全、準(zhǔn)確、及時、有效地進(jìn)行，從樣本接收到報告發(fā)出的全過程應(yīng)實行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。正確規(guī)范的制片技術(shù)能夠保證制片質(zhì)量，減少各種因素對制片質(zhì)量的影響，對于提高腫瘤細(xì)胞陽性檢出率有重要意義。質(zhì)量管理控制體系應(yīng)符合國家法律、法規(guī)以及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。

一、細(xì)胞固定

細(xì)胞固定是用各種方法使細(xì)胞內(nèi)時的物質(zhì)盡可能接近其存活狀態(tài)時的形態(tài)、結(jié)構(gòu)和位置的過程。固定是為了防止細(xì)胞自溶與腐敗，防止細(xì)胞內(nèi)的酶對蛋白質(zhì)的分解作用，使細(xì)胞內(nèi)的各種成分如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持原有的結(jié)構(gòu)。在細(xì)胞涂片制片過程中，防止細(xì)胞退變是最關(guān)鍵的一步，其關(guān)系到能否對這些細(xì)胞做出正確的判斷。一方面送檢樣本要盡可能的新鮮，另一方面制片完成后要迅速固定。 胸腔積液、腹腔積液、心包積液等樣本，本身就是一種很好的細(xì)胞“培養(yǎng)基”，在室溫下保存24~48h細(xì)胞退變并不明顯；痰液中的黏液對脫落細(xì)胞的保存起到很好的保護(hù)作用，在密封的瓶、盒內(nèi)保存時間可以更長，但對抗原、DNA檢測有沒有影響不確定。因此，如果需留置較長時間(>24h)以后才能制片的樣本，則應(yīng)該在樣本中加入固定液或按說明書要求放入液基細(xì)胞制片固定液內(nèi)。而針吸細(xì)胞必須在穿出后立即制片、固定。各種未固定的沖洗液、灌洗液等樣本，人為加入了生理鹽水或其他液體，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、退變以及細(xì)菌大量繁殖，必須立即制片；同樣，尿液、腦脊液、囊腫穿刺液等樣本也應(yīng)該及時制片。

一張質(zhì)量合格的細(xì)胞涂片，必須能夠清楚地展現(xiàn)細(xì)胞的核膜、核仁、染色質(zhì)和完整的細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)。引起細(xì)胞退變的最主要原因并非送檢時間長，而是在制片過程中產(chǎn)生的，如在細(xì)胞涂片時，若細(xì)胞干燥，可以在幾秒鐘內(nèi)引起細(xì)胞退變。因此，涂片后的快速固定是細(xì)胞學(xué)制片的關(guān)鍵；同時，在細(xì)胞染色過程中若涂片干燥，如固定后干燥、染色完成后吹干、烤干后封片，都會引起細(xì)胞的退變，只是條件不同，退變的程度也不相同。

(一)干固定法

干固定法就是讓涂片自然風(fēng)干、吹干或加熱干燥的固定方法，這個方法適用于瑞氏、姬姆薩和一些快速染色法，以及需要觀察的特殊樣本，如結(jié)晶體。然而，用于HE染色或巴氏染色時，干固定的樣本細(xì)胞形態(tài)表現(xiàn)為高度腫脹、退變，在判讀時容易被誤診。因此，一般不贊成在常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查時是使用干固定法。當(dāng)細(xì)胞量特別少時，如尿液、關(guān)節(jié)腔液、腦脊液等離心后看不到沉淀物，只能吸出極少量液體涂片，需要加熱干燥，溫度控制在60~80℃，在涂片上有液體的情況下高溫干燥可以導(dǎo)致細(xì)胞收縮，但會減少細(xì)胞的退變；過低的溫度加熱由于干燥時間延長而加快了細(xì)胞的退變。

(二)濕固定法

濕固定法是指將獲得的細(xì)胞在完成制片后(細(xì)胞還處于濕潤狀態(tài))，立即放入醇性固定液(95%乙醇、95%乙醇冰乙酸液、甲醇、甲醇冰乙酸液、乙醚乙醇液等)內(nèi)固定的方法。這種方法是目前最好的固定方法，可以完好地保存細(xì)胞內(nèi)的各種結(jié)構(gòu)和形態(tài)，對于正確認(rèn)識各種細(xì)胞的性質(zhì)，減少細(xì)胞學(xué)的誤診有很大的幫助。

細(xì)胞固定20~30min后，直接從固定液內(nèi)拿出并放入染色液中染色，無需水洗(水洗容易使細(xì)胞脫落)。如果需要拿至其他單位染色，可讓其自然風(fēng)干(經(jīng)干燥處理的載玻片，在染色之前必須先浸入醇性固定液內(nèi)再處理15~20min)，之后才能進(jìn)行染色，并且會有一定程度的細(xì)胞退變。

濕固定后的固定液，每次使用后應(yīng)及時更換，防止脫落的細(xì)胞污染再次放入的涂片。在固定和染色時，應(yīng)該將痰與其他樣本分開固定、分開染色，不使用同一缸蘇木色精、曙紅染液和脫水液(或在使用前過濾)，因為痰樣本很容易從固定液、染液、脫水液中吸附從其他樣本中脫落的細(xì)胞，特別是腫瘤細(xì)胞，造成人為的污染，導(dǎo)致誤診。

若樣本不能及時處理，如遠(yuǎn)途運(yùn)送、需等待數(shù)天后才能制片，需經(jīng)特殊的方法處理：如在一兩天時間內(nèi)，胸腔積液、腹腔積液、心包積液等可存放在4℃冰箱冷藏而無須加固定劑；如須放置時間較長，在胸腔積液、腹腔積液、心包積液、尿液、腦脊液、痰等樣本內(nèi)加入 50%等量乙醇，或以樣本量為基數(shù)，以9：1的量加入甲醛溶液。